المستخلص
جمعت 130 عينة بكتيرية سريرية من المرضى الراقدين في عدة المستشفيات من مدينة بغداد شملت (مستشفى الامامين الكاظمين (ع)، مستشفى الكرخ العام، مستشفى اطفال الكاظمية، مستشفى الحروق، مستشفى غازي الحريري ومستشفى بغداد) في الفترة من 15/10/2023 الى 25/12/2023. وبعد التشخيص النهائي تم الحصول على 50 عزلة بنسبة (38.4 %) من بكتريا Klebsiella pneumoniae. تم استعمال برنامج التحليل الاحصائي لايجاد متوسطات القيم والخطأ القياسي وايجاد العلاقة بين المتغيرات والارتباطات بين المعاملات والجينات.
تم تشخيص العزلات بالاختبارات المظهرية بعد تنميتها على مجموعة من الاوساط الزرعية منها وسط اكار الماكونكي، وسط اكار الايوسين مثلين الازرق، وسط اكار الدم، وسط اكار الكرومايجين. والاختبارات المجهرية والاختبارات الكيموحيوية التي شملت اختبار الاوكسيديز واختبار الاندول واختبار الحركة واختبار الاحمر المثيل وللتشخيص النهائي استخدم التشخيص الجيني عن طريق الكشف عن جين .16SrRNA
وكانت أعلى نسبة عزل لبكتريا K.pneumoniaeمن عينات الادرار للمرضى المصابين بالالتهابات المسالك البولية اذ بلغت 25 عزلة بنسبة (50%)، 14 عزلة بنسبة (28%) من القشع، 6 عزلات بنسبة (12%) من الجروح، 3 عزلات بنسبة (6%) من الدم، عزلتين بنسبة (4%) من الحروق.
تمت دراسة اختبار الحساسية لـ 15 مضاد حيوي بأستخدام جهاز الفايتك لعزلات بكتريا K.pneumoniae وشملت كل من المضادات:Ticarcillin ، Ticarcillin/Clavulanic acid، Piperacillin، Piperacillin/Tazobactam، Ceftazidime، Cefepime، Aztreonam، Imipenem، Meropenem، Amikacin، Gentamicin، Tobramycin، Ciprofloxacin، Minocycline، Trimethoprim/ Sulfamethoxazole.
اظهرت جميع العزلات البكتيرية مقاومة لمضادي Ticarcillin و Piperacillin وبنسبة (100%)، ولمضاد Aztreonam بنسبة (88%)، وللمضاد Ticarcillin/Clavulanic acid وبنسبة (86%)، ولمضادي Ceftazidime و Trimethoprim/ Sulfamethoxazole بنسبة (78%)، ولمضادي Cefepime وCiprofloxacin بنسبة (68%)، ولمضاد Tobramycin بنسبة (66%)، ولمضادي Piperacillin/Tazobactam و Imipenem بنسبة (64%)، ومضاد Meropenem بنسبة (60%)، ومضاد Gentamicin بنسبة (56%)، ومضاد Amikacin بنسبة (40%)، واخيرا مضاد Minocyclineبنسبة (34%).
كذلك تم تحديد انماط المقاومة للمضادات الحيوية لـ (15) مضاد حيوي الذي تمت دراسته في بكتريا K. pneumoniae ووجد ان هذه البكتريا تمتلك 12 نمطاً مقاوماً للمضادات الحيوية، ونمط المقاومة للمضادات المتعددة الذي كان بنسبة 34(68%) من عزلات K.pneumoniae المدروسة، وقابلية العزلات البكتيرية على تكوين الغشاء الحيوي بنسبة عالية بلغت (100%) وبدرجات متفاوتة بالمقارنة بالسيطرة السالبة وباستخدام الصفيحة العيارية، في حين كانت 31 عزلة بكتيرية بنسبة (62%) لها القابلية على التكوين القوي للغشاء الحيوي، و13 عزلة بكتيرية بنسبة (26%) لها القابلية على التكوين المتوسط للغشاء الحيوي، و6 عزلات بكتيرية بنسبة (12%) لها القابلية على التكوين الضعيف للغشاء الحيوي.
تم التحري عن بعض جينات انظمة مضخة الدفق التي تمتلكها بكتريا K.pneumoniae بطريقة تفاعل البوليمريز المتسلسل والتي شملت acrAB، TolC، mdtk، oqxA، oqxB. واظهرت نتائج الدراسة الحالية وجود هذه الجينات في البكتريا المدروسة بنسبة 100%، 100%، 70%، 100%، 54% على التوالي.
كانت نتائج التركيز المثبط دون الحد الادنى بطريقة الصفيحة العيارية لجميع العزلات المقاومة للمضادات الحيوية (11، 22، 25، 33، 41) لمضاد Gentamycin بلغت 25 ميكروغرام /مل، اما نتائج التركيز المثبط دون الحد الادنى للعزلات المقاومة للمضادت الحيوية لمضاد Ceftazidime بلغ 3.9 ميكروغرام /مل لاربع عزلات بكترية (22، 25، 33، 41) اما العزلة (11) فقد كان التركيز المثبط دون الحد الادنى 1.9 ميكروغرام /مل. اما العزلة الحساسة للمضادات الحيوية فقد استخدمت طريقة الانابيب وبلغ التركيز المثبط دون الحد الادنى 0.0156 ميكروغرام /مل للمضادينCeftazidime و Gentamycin.
بينت نتائج الدراسة تأثير كل من المضادين Ceftazidime وGentamicin وتآزرهما معا على التعبير عن جينات مضخة الدفق الخمسة acrAB، TolC، oqxA، oqxB، mdtk لخمسة عزلات من بكتريا K. pneumoniae كانت ذات مقاومة متعددة للمضادات الحيوية وعزلة اخرى كانت حساسة للمضادات الحيوية المتعددة وجود فروق معنوية عالية p≤0.001 بين معظم المعاملات المدروسة بالنسبة لتكرار الجينات acrAB، TolC، oqxA، oqxB، mdtk في العزلات المقاومة (11، 22، 25، 33، 41) باستثناء معاملة المضاد الحيوي Ceftazidime التي تتكرر فيها نسبة الجينات oqxA، acrAB وtolC (80%) ومعاملة المضاد الحيوي Gentamicin التي تتكرر فيها نسبة الجين oqxB (50%) وخليط المضادين الحيويين Ceftazidime+Gentamicin معا الذي تتكرر فيه نسبة الجينات oqxA، acrAB وtolC (20%) حيث كانت غير معنوية p>0.05.
اما بالنسبة للطي الجيني Gene folding فقد اظهرت نتائج التعبير الجيني باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي للعزلات المقاومة ارتفاع في الطي الجيني Gene folding في كل الجينات المعاملة بالمضاد الحيوي Ceftazidime في حين ارتفع الطي الجيني في الجينين tolC وmdtk بالنسبة بالمعاملة بالمضاد الحيوي Gentamicin اما الخليط التآزري من المضادين الحيويين Ceftazidime+Gentamicin فقد سجل الجين mdtk فقط ارتفاع في الطي الجيني Gene folding.
وبالنسبة للارتباط بين الجينات في المعاملات الثلاثة للعزلات المقاومة، فقد اظهرت النتائج ان هناك ارتباط عالي وسالب (ارتباط عكسي) بين الغالبية العظمى من الجينات حيث تراوح ما بين r=-1.000 وr=-0.866 ما عدا معاملة خليط المضادين الحيويين Ceftazidime+Gentamicin معا والتي سجلت نسبة تكرار الجين mdtK (100%) حيث كان الارتباط موجب لهذه المعاملة r=0.866 مع كل الجينات في معاملات العزلات المقاومة الثلاثة وكذلك كان هناك ارتباط عالي وسالب او موجب تراوح ما بين r=-0.785 وr=-0.688 و r=0.760 بين المعاملات الثلاثة وذلك باستخدام معامل بيرسون للارتباط.
في حين بينت النتائج عدم وجود فروقات معنوية p>0.05 بين معظم المعاملات المدروسة بالنسبة لتكرار الجينات في العزلات الحساسة باستثناء معاملة المضاد الحيوي Ceftazidime التي يتكرر فيها نسبة الجين oqxA (100%) وخليط المضادين الحيويين Ceftazidime+Gentamicin معا الذي تكررت فيه نسبة الجينين oqxA وtolC (100%) حيث كانت معنوية عالية وعند مستوى احتمالية p≤0.001.
وسجل الطي الجيني Gene folding للعزلات الحساسة انخفاض معنوي p≤0.001 في التعبير الجيني لمعظم العزلات المدروسة مقارنة بمعاملة السيطرة ما عدا الجين oqxA في معاملتي المضاد الحيوي Ceftazidime وخليط المضادين الحيويين Ceftazidime+Gentamicin والجين tolC في معاملة خليط المضادين Ceftazidime+Gentamicin اذ سجلوا ارتفاع طفيف غير معنوي p>0.05 مقارنة بمعاملة السيطرة.
اما بالنسبة للارتباط بين الجينات في المعاملات الثلاثة للعزلات الحساسة، فقد اظهرت نتائج وجود ارتباط وعلاقة عالية وسالبة (عكسي) بين كل الجينات في كل المعاملات حيث تراوح ما بين r=-1.000 وr=-0.866 في حين كان هناك ارتباط عالي وموجب (طردي) r=0.612 بين معاملتي Ceftazidime للعزلات الحساسة وبين خليط المضادين الحيويين Ceftazidime+Gentamicin معا في حين لم تظهر بقية المعاملات بالنسبة للعزلات الحساسة اي ارتباط لعدم تسجيلها اي وجود اي متغير فيها باستخدام معامل بيرسون للارتباط.
بينت نتائج التنميط الجيني لبكتريا K. pneumoniae باستعمال طريقة التضخيم العشوائي للحمض النووي متعدد الأشكال عن وجود 12 أنماط متميزة مع الوزن الجزيئي 250-1500 زوج قاعدة، وكانت الحزم الأكثر شيوعًا هي 500 و550 و1400 زوج قاعدة. ومع ذلك، أظهرت 43(86٪) من العزلات تحتوي على حزم، ولكن 7عزلات بنسبة (14٪) لم تظهر ذلك.
